WinScript RTⅢ All-in-one Mix for qRCR with dsDNase

一步法cDNA 第一链合成预混试剂（去基因组）

说明书

产品信息 Products

产品描述 Product overview

本产品是一款高效、快捷的cDNA一链合成预混液，包含所有一链cDNA合成反应所需组分（WinScript RTIII及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs, Oligo(dT)₂₀VN和随机引物等），反应中仅需加入RNA模板和水。预混液中的Wincript RTIII是基于M-MLV开发的第三代逆转录酶，降低了RNase H活性，提高了热稳定性，反应温度高达55°C，大幅提升了逆转录效率和对复杂模板（大量二级结构或高GC比例）的耐受性，具有更高的特异性、更高的产量。本产品中WinScript dsDNase，可 去除RNA模板中残留的基因组DNA，使定量结果更加准确；同时其具有热敏感性，可在高温条件下快速不可逆地失活。因此仅需一次加样，即可同管进行去除基因DNA 污染与逆转录反应。

质量控制 Quality control

核酸内切酶残留检测

将本产品与超螺旋质粒DNA在37℃温育4 h，通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测

将本产品与双链DNA底物在37℃温育16 h，通过琼脂糖凝胶电泳检测双链DNA底物无变化。

使用方法 Usage method

链cDNA合成

a.推荐使用试剂盒提取的高质量RNA作为模板。

1.于冰上加入以上反应组分：

2.轻柔吸打混匀，瞬离；

3.37℃温育2 min，以去除基因组DNA污染；

4.55℃温育15 min；

5.反应结束后，85℃温育5 min以终止反应；

6.迅速将获得的cDNA置于冰上，用于后续实验；或立即保存于-20℃。

运输与保存方法 Transportation and preservation methods

-20℃保存。

注意事项 Matters need attention

1.使用WinScript RTIII All-in-One Mix时，请充分融解，混匀后使用，避免强光直射。若同时需要配制多个WinScript RTIII All-in-One Mix反应时，应提前配制好所需的工作液，然后再分装到每个反应管，减少试剂损失。

2.分取之前请瞬时离心收集到管底后使用，使用后立即放回-20℃冰箱保存。

3.反应液的配制和分装一定使用无污染的枪头、Microtube，尽量避免污染。

4.预混液中已经包含Oligo(dT)₂₀VN和随机引物，不仅适用包含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。