产品展厅
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2×Almighty PCR Mix(Dye Plus)
说明书
产品信息 Products
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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2×Almighty PCR Mix(Dye Plus) |
YMM-01001H |
1mL |
产品描述 Product overview
2×Almighty PCR Mix是2×预混液，其中包含聚合酶、dNTPs、反应 buffer(含MgCl2)等成分，使用方便快捷，能减少 PCR 操作过程中的污染。使用时只需取适量 2×Almighty PCR Mix，加入模板和引物，并加入ddH2O补足体积，使反应体系浓度为1×即可进行 PCR 反应。
该产品具有快速扩增性能，延伸速度 可达10-15s/kb,基因组模板最长可扩增5 kb。具有良好的模板兼容性，对浓度较低的模板有良好的扩增性能，含有PCR抑制剂或AT含量较高的模板也可有效扩增。
质量控制 Quality control
核酸内切酶残留检测
将本产品与超螺旋质粒DNA在37℃温育4 h，通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒无变化。
核酸外切酶残留检测
将本产品与双链DNA底物在37℃温育16 h，通过琼脂糖凝胶电泳检测双链DNA底物无变化。
运输与保存方法 Transportation and preservation methods
冰袋运输；-20℃保存，有效期2年；建议 次使用时分装冻存，避免反复冻融。
使用方法 Usage method
1.常规 PCR 反应体系
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试剂 |
20 μl 体系 |
50 μl 体系 |
终浓度 |
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2×Almighty PCR Mix |
10 μl |
25 μl |
1× |
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正向引物（10 μM）a |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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反向引物（10 μM）a |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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DNA模板b |
X μl |
X μl |
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ddH2O |
To 20 μl |
To 50 μl |
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a.引物推荐浓度为0.2-0.4 μM，效果不佳时可以在0.1-1 μM浓度范围内进行调整。
b.不同模板 发应浓度有所不同，以50 μl体系为例：模板为基因组DNA时，一般推荐使用量为10-400 ng；当模版为质粒或者病毒DNA时，一般推荐的使用量为10pg-20ng。
2.常规 PCR 反应程序
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步骤 |
温度 |
时间 |
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预变性 a |
94℃ |
3~5 min |
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变性 |
94℃ |
15 sec |
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退火 |
53~65℃ |
15 sec |
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延伸 b |
72℃ |
30~60 sec/kb |
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终延伸 |
72℃ |
5 min |
a.菌落的PCR扩增，预变性时间可延长至10 min，以提高预变性效果。
b.关于延伸速率，当目的片段长度不超过2 kb时，推荐使用15~30 sec/kb；当目的片段长度大于2 kb时，推荐使用30~60 sec/kb。延伸速率与模板复杂程度有关，如遇产率较低可适当提高延伸时间。
注意事项 Matters need attention
1.本产品在短期-20°C储存时不会凝固，可以随取随用，如遇储存温度波动，体系结冰为正常现象不影响使用；
2.建议将所有的反应组分在冰上配制， 加入2×Almighty PCR Mix；
3.使用基因组模板进行较长片段扩增需要使用高质量纯化的DNA模板，可以提高PCR成功率；
4.本产品扩增产物可用于T/A克隆。
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