1）去除糖蛋白的N-连接高甘露糖。
2）仅切割高甘露糖型结构（n=2-150, x=(Man)1-2, y=H）和杂合型结构（n=2, x和/或y=AcNeu-Gal-GlcNAc）。
20mM Tris, 50mM NaCl, 5mM EDTA pH7.5, -20℃保存。
在20μl的反应体系中，37℃条件下，1小时从10μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需的酶量定义为一个单位。
将1×糖蛋白在糖蛋白变性缓冲液（0.5%SDS, 40mM DTT）中100℃煮沸10分钟使其变性，然后在1×反应缓冲液（50mM柠檬酸钠 pH 5.5 , 25℃）中于37℃温育，进行酶切反应。
1）酶活性不受SDS影响。
2）要使天然糖蛋白去糖基化，可尝试增加酶量，延长温育时间。
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