2.稳定性
本试剂盒在室温储存 9 个月不影响使用效果。
3. 注意事项
1).Bead Tube 中添加 Sodium Phosphate Buffer 和 MT Buffer 后，应留出足够的空间，以便进行有效的 FastPrep®仪器等研磨仪的处理。建议使用 500 mg 的样本材料，且保障 Bead Tube 中有 250-500μL的剩余空间。
2).避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、 pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3).为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4).本产品仅作科研用途！
4. 使用前准备：
1).自备设备和试剂：台式离心机（≥12,000 rpm 转速）、研磨仪、水浴锅或金属浴，无水乙醇，离心管等。
2).所有的离心步骤均在室温完成。
3).首次使用前，须在 PQ Solution 瓶中加入 2 倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。
4).首次使用前，须在 Buffer WB 瓶中加入 4 倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。
5. 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
※第一次使用前请先在 PQ Solution 和 Buffer WB 瓶中加入指-定量无水乙醇！
一、样本预处理：
1.取 500 mg 土壤样本至 Bead Tube 中。
2.加入 980 μL Sodium Phosphate Buffer 至 Bead Tube 中，轻柔涡旋混匀。
3.加入 120 μL MT Buffer。
【注】：MT Buffer 易形成沉淀，若出现沉淀，使用前，60℃水浴复溶。
4.将 Bead Tube 置于研磨仪中，40 Hz 处理 40 sec。亦可使用 FastPrep®
Instrument，速度设置 6.0 匀浆 40 sec。
5.12000 rpm 离心 5 min，沉淀碎片颗粒。
6.转移上清液至另一干净的 2 mL 离心管中。加入 250 μL PPS Solution，
手动晃动 10 次混匀。然后 4℃放置 5 min。
7.12000 rpm 室温离心 3 min，之后取不多于 900 μL 上清液，转移至另
一干净的 2 mL 离心管中。
8.加入 1/3 体积的 IRS Solution（如上清液为 900 μL，则添加 300 μL IRS
Solution），轻柔涡旋混匀。4℃放置 5 min。
9.12000 rpm 室温离心 1 min。转移上清液至 5 mL 离心管中。
10.加入 1.5 倍体积的缓冲液 PQ Solution，立即吹打混匀。
【注】：出现沉淀对后续操作无影响。
【注】：吸取上清液，应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
【注】：请务必将 PQ Solution 直接加入上清液中并立即混匀。
二、 DNA 提取：
1.将 DNA Bind Column 套入 2 mL 收集管中，备用。
2.将预处理混合液加入到 DNA Bind Column 中，12,000 rpm 室温离心 1
min，弃掉废液。
【注】：混合液每次最大加入体积 700 μL，可分多次离心。
【注】：离心后，若滤膜仍有液体残留，可延长离心时间至 5 min。
3.将 DNA 吸附柱放回收集管中，加入 600 μL Buffer WB，12,000 rpm 室
温离心 30 sec，弃废液。
【注】：确保 Buffer WB 已添加无水乙醇。
4.重复一遍步骤 3。
5.将 DNA Bind Column 放回收集管中，空柱 12,000 rpm 室温离心 2 min，以除去残留的 Buffer WB。
6. 将 DNA Bind Column 放入新的洁净 1.5 mL 离心管中，在滤膜中央加入 30-100 μL 的 Elution Buffer，室温放置 3 min。然后 12,000 rpm 离心 1 min，收集滤液即为样本 DNA。
【注】：可通过以下方式提高回收产量：65℃预热洗脱液；将滤液再次上柱，
室温放置 3 min，洗脱。
【注】使用较小体积（至少 30μl）的 Elution Buffer 将获得更高的浓度。
7.样品 DNA 可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。
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