产品组成、储存、浓度:
储存:-20 ℃ 避光保存至少12个月,使用前充分融解混匀。短期使用可放在4 ℃,避免反复冻融。
制品说明:本制品是采用SYBR® Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将热启动HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA和SYBR® Green I等试剂预混成一种适合Real Time PCR反应检测用2×Premix Type试剂,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板和引物和水,便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。本品采用全新的Hotmaster Taq DNA 聚合酶,该酶不同于一般Hot-start 酶之处在于,一般的Hot-start 酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性,而Hotmaster Taq DNA 聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭Hotmaster Taq DNA聚合酶的底物结合位点,温度低于40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动,因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。
注意事项:
1. 本制品已加入低浓度的ROX参比染料,适用于ABI 7500, 7500 Fast, Q6, ViiA™7, Quant Studio 6/7Flex; Stratagene MX4000, MX3005, MX3000;Corbett Rotor Gene 3000以及其它需要低浓度ROX机型。用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2. 本制品含SYBR® Green I 强光下易分解,降低敏感度,使用时避免长时间强光照射本制品。
3. 建议在冰上配制PCR反应液,再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性,减少背景。
4. 本制品含有4 mM MgCl2(反应体系终浓度是2 mM Mg2+),可用25mM MgCl2 优化Mg2+浓度。
建议PCR条件(以20,50 μl反应体系为例,反应液配制请在冰上进行)
Components |
Volume(20 μl) |
Volume(50 μl) |
Final Concentration |
2 x SYBR qPCR Mix |
10μl |
25 μl |
1× |
DNA Template |
0.8 μl |
2 μl |
as required |
Forward Primer (10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM each |
Reverse Primer (10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM each |
ddH2O to final volume |
20 μl |
50 μl |
Not applicable |