Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒 提供了一种以微观方式标记抗体的最便捷方法。PE-Cy7是流式细胞术中常用的颜色。其主要吸收峰位于565nm，发射峰位于~780nm。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE-Cy7串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。 Buccutite PE-Cy7共轭试剂盒为您的抗体与PE结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括预活化的PE和反应缓冲液。整个过程仅需要两次简单的混合，无需进一步纯化。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应最多25μg抗体。考虑到PE的大尺寸（240kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于PE的量。任何新抗体试剂的最佳比例必须通过实验确定，但每50μgPE使用25μgIgG抗体通常可获得最佳结果。我们的试剂盒提供预活化的PE-Cy7，以促进PE-Cy7串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化PE-Cy7串联已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化PE-Cy7串联通过其蛋白质丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

实验方案

操作步骤

1.运行Antibody-Buccutite MTA反应

1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。

2.制备抗体-PE-Cy7缀合物

2.1通过向Buccutite FOL活化的PE-Cy7（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE-Cy7溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

2.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE-Cy7溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。

2.3抗体-PE-Cy7结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE-Cy7结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE-Cy7结合物溶液。

3.抗体-PE-Cy7共轭物的储存

抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE-Cy7缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE-Cy7缀合物冻干并在≤-20℃下储存。

参考文献

Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573

Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016

Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598

Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59

Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113

Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749

Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171

Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9

Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226

[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82