Portelite 荧光蛋白定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量蛋白的试剂盒 ，蛋白质定量是蛋白质纯化，电泳，细胞生物学，分子生物学和其他研究应用中的重要组成部分。 Biuret，Lowry，BCA和Bradford检测常规用于估计蛋白质浓度。然而，这些比色测定不太敏感，并且需要大的样品体积以确保准确性。我们的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒比现有的比色蛋白测定法（例如Bradford和Bicinchoninic acid（BCA）测定法）更敏感。试剂盒中使用的Prolite 橙在水溶液中是非荧光的，但与蛋白质反应迅速并产生明亮的荧光。 Portelite 荧光蛋白定量试剂盒提供了一种简单的方法来定量溶液中的蛋白质浓度。该测定的动态范围为12.5ug / mL至5mg / mL的BSA。该套件针对Cytocite 和Qubit 荧光分析仪进行了优化。它可用于（1）研究蛋白质/蛋白质相互作用; （2）亲和层析后测定柱级分; （3）估计细胞提取物中膜蛋白的回收率; （4）融合蛋白的高通量筛选。

操作步骤

简要概述

准备并添加BSA标准品或测试样品（10μL）
在0.2 mL PCR管（Cat＃CCT100）中制备并添加Prolite 橙色工作溶液（190μL）
在室温下孵育15分钟
使用CytoCite 或Qubit荧光分析仪监测荧光

溶液制备

Prolite 橙色工作溶液：
将5μLProlite Orange（200X）（组分A）加入995μL样品稀释缓冲液（组分E）中并充分混合。 注意：请勿将工作溶液混入玻璃容器中。

样品实验方案

该方案适用于Qubit®荧光分析仪。

1.运行蛋白质测定

1.1每孔加入190μL/孔的Prolite Orange工作溶液。

1.2将10μLBSA标准品（组分B，C，D）或10μL样品加入190μLProlite Orange工作溶液管中，使最终测定体积为200μL/管。

1.3在室温下孵育反应15分钟。 注意：保护样品避光，避免将样品拿在手中。

1.4将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。 按照适用于CytoCite 荧光计的步骤进行操作。具体操作点击查看 。

2.Qubit®荧光计的简要方案

2.1按Qubit®主屏幕主屏幕上的蛋白质，然后按读取标准。

2.2将3个含有标准的试管中的每一个插入样品室。

2.3关闭盖子并按Read标准。

2.4仪器显示结果并生成校准曲线。

2.5按Run sample并选择样品量至10μL。

2.6将样品管插入样品室。

2.7盖上盖子，然后按Read tube。

2.8仪器在实验屏幕上显示结果。 最高值是原始样品浓度，最低值是稀释浓度。

3.标准溶液制备

        对于CytoCite 荧光计测定，您可以选择使用自己的蛋白质标准进行校准。这是一个生成定制蛋白质标准曲线的简要方案。

3.1在PBS缓冲液中制备400μg/ ml（400 ng /μL）的蛋白质溶液。

3.2用PBS缓冲液进行1：2连续稀释，得到200,100,50,25,12.5ng /μl系列标准稀释液。

3.3将190μLPolite 橙色工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

3.4每管加入10μL标准品或10μL样品。

3.5在室温下孵育反应15分钟。

3.6将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。

图示

图1使用Portelite 荧光蛋白定量试剂盒*优化用于CytoCite 和Qubit 荧光分析仪*和Qubit®荧光分析仪，在Ex / Em 485 / 5000nm下测量BSA，鸡蛋卵清蛋白，猪甲状腺球蛋白的系列稀释液。 可以检测到低至50 ng / mL的蛋白质。

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