磷酸基团近红外荧光染料 SunRed是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸 的试剂盒，磷酸酶催化的太阳红磷酸盐（SRP）的水解产生可以用633nm激光激发并且发射~660nm的太阳红荧光团。虽然Sun Red很容易在633 nm处激发，红色发射约为660 nm，但SRP在633 nm处的吸收非常小，没有红色发射，使SRP成为最敏感的NIR磷酸酶传感器之一。请不要使用DMSO制备储备溶液，因为它会显着增加分析背景。

样品实验方案

简要概述

1.在Tris缓冲液（50μL）中制备并添加10 - 50μMSunRed 磷酸盐
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育30至120分钟
4.监测Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度（截止640 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 SunRed 磷酸盐原液：
在无菌水中制备2至10 mM的SunRed 磷酸盐储备液。 注意：应立即使用原液。 注意：不要使用DMSO，ETOH或METH制备储备溶液，因为它会显着增加分析背景。 注意：避光。

2.工作溶液

SunRed 磷酸盐工作溶液（2X）：
在实验当天，将SunRed 磷酸盐固体溶解在无菌H2O中，或在室温下解冻等份的SunRed 磷酸盐储备溶液。 在100 mM Tris缓冲液或pH 8至9的缓冲液中制备10至50μM的2X工作溶液。建议使用SunRed 磷酸盐终浓度5至25μM测定溶液中的碱性磷酸酶活性。

样品分析

1.在碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL2XSunRed™磷酸盐工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL样品和25μL2XSunRed™磷酸盐工作溶液。

2.在所需温度下孵育反应30至120分钟，避光。

3.用荧光板读数器监测Ex / Em = 620 / 630nm处的荧光增加（在640nm处截止）。

参考文献

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