MitoLite 线粒体近红外荧光探针是美国AAT Bioquest生产的用于染色线粒体的荧光探针 ，线粒体是在大多数真核细胞中发现的膜封闭细胞器。线粒体产生大多数细胞中的ATP供应。线粒体除了提供细胞能量外，还参与一系列其他过程，例如信号传导，细胞分化，细胞死亡以及细胞周期和细胞生长的控制。线粒体与多种人类疾病有关，包括线粒体疾病障碍，并可能在衰老过程中起作用。Mitolite NIR FX690设计用于通过近红外荧光标记活细胞中的线粒体。它可能通过线粒体膜电位梯度选择性地积累在线粒体中。对于低背景和高信噪比至关重要的活细胞和组织成像，它是理想的选择。这种荧光的线粒体指示剂带有细胞保留基团，因此可以在线粒体中保留很长时间。此关键功能大大提高了染色效率。它可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞生存力，细胞凋亡和细胞毒性。

样品实验方案

1.准备线粒体染色溶液：

1.1将MitoLite 染料加热至室温。

1.2通过将20 μL的500 X Mitolite 染料稀释到10 mL的Hanks和20 mm Hepes缓冲液或您选择的缓冲液（HBSS）中来制备染料工作液。

注1：20 μL Mitolite 染料足以用于一块96孔板。 分装并在<-15℃下存储未使用的MitoLite 染料原液。 避免光照，并避免重复的冻融循环。

注2：荧光线粒体指示剂的最佳浓度因具体应用而异。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于贴壁细胞：a）在96孔黑色壁/透明底板（100 μL /孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上生长细胞。 当细胞达到所需的汇合度时，添加等体积的染料工作溶液（来自步骤1.2）。 b）将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育30分钟至2小时。 C）更换染料加载溶液，或用预热的（37°C）汉克斯和20 mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液（例如，含有1：1浓度的生长培养基的缓冲液）洗涤细胞（尤其对于cat＃22679） ）。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d）。使用装有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意：建议增加标记浓度或孵育时间，以使染料在细胞未充分染色的情况下积累。

2.2对于悬浮细胞：以1000 rpm离心细胞5分钟，以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热的（37°C）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料工作溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育30分钟至2小时。更换染料加载溶液或用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如具有1：1浓度的生长培养基的缓冲液）洗涤细胞（特别是对于cat＃22679）。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。使用装有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注1：建议增加标记浓度或孵育时间，以使染料在细胞似乎未充分染色的情况下积累。

注2：悬浮细胞可以附着在已经用BDCell-Tak®（BD Biosciences）处理过并被染色为贴壁细胞的盖玻片上（参见步骤2.1）。

参考文献

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