Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH 的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter™细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒提供了监测远光谱中活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，并且可以与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。 JJ1902 NAD（P）H是一种优秀的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JJ1902 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy5®过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。

实验样品示例

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H传感器工作溶液在37℃孵育20  -  30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.在Ex / Em = 590/655 nm（截止= 610 nm）或使用Cy5®过滤器的荧光显微镜下监测荧光强度（底部读取模式）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.制备工作溶液

将10μL JJ1902 NAD（P）H探针储备溶液（组分A）加入2.5mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。该JZL1707 NAD（P）H探针工作溶液在室温下1小时内稳定。

注意：40μL的JZL1707 NAD（P）H传感器原液足以用于一个板

2.实验步骤

①刺激NADP / NADPH，用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）在无血清培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也是兼容的。探针的条件优化是强烈推荐的细胞系到细胞系。

②在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液。将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃共孵育20-30分钟，避光。

注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将HeLa细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共培养30分钟。 详细信息请参见图1。

③用所需缓冲液洗涤细胞一次。移除每个孔中的溶液，并添加100μL/孔的测定缓冲液（组分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

④使用底板读取模式在Ex / Em = 590 / 655nm（截止= 610 nm）下使用酶标仪监测荧光增加，或使用荧光显微镜和Cy5®过滤器过滤器获取图像。

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124--133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621--7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416--427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225--235