DAX-J2 比率 580/460 一氧化氮NO荧光探针是美国AAT Bioquest生产的检测一氧化氮 的试剂，DAX-J2 Ratio 580/460是最近由AAT Bioquest开发的新型一氧化氮（NO）传感器。它是一种细胞渗透性试剂，可以在生理条件下以比率模式测量活细胞中的游离NO和一氧化氮合酶（NOS）活性。一旦进入细胞内，就释放DAX-J2试剂上的阻断基团，以在NO氧化时诱导波长为580和460nm的荧光比率变化。可以使用Cy3®/ TRITC和BD Horizon V450 / Pacific Blue的过滤器组检测580 nm和460 nm的荧光强度。这两个过滤器组配备了大多数流式细胞仪和荧光显微镜。与常用的DAF-2 NO探针相比，DAX-J2 Ratio 580/460具有明显的NO检测优势：1）NO检测不需要酯酶活性。 DAF-2需要细胞内酯酶切割其乙酸酯基团以检测NO活性。这种酯酶依赖性常常使NO检测复杂化，因为酯活性受细胞健康和许多其他因素的影响。 2）DAX-J2产品表现出不依赖于pH的荧光，而DAF-2的荧光受pH的影响很大。 3）DAX-J2 Ratio 580/460可以采用比例模式进行监控。

样品操作及实验分析

1）在DMSO中准备5至10 mM DAX-J2 储备溶液。 通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）将DMSO储备溶液稀释到Hanks溶液中，制成1至10 μM的工作溶液。

2）根据需要处理细胞。

3）在37℃下，将细胞与1-10 μM（来自步骤1），DAX-J2 橙色（目录号16300），红色（目录号16301）或比率580/460（目录号16310）孵育20 -60分钟。

4）用HHBS缓冲液代替染料加载溶液。

5）使用底部读取模式的适当荧光仪器分析细胞。

参考文献

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