一氧化氮NO荧光探针 DAX-J2 橙  是美国AAT Bioquest生产的检测一氧化氮 的试剂，DAX-J2 Orange是AAT Bioquest最近开发的新型一氧化氮（NO）传感器。它是一种非荧光细胞可渗透试剂，可以在生理条件下测量活细胞中的游离NO和一氧化氮合酶（NOS）活性。一旦进入细胞内，DAX-J2试剂上的封闭基团就会被释放，从而在NO氧化后生成高度荧光的产物。可以使用大多数流式细胞仪和荧光显微镜配备的Cy3®和TRITC过滤器套件检测DAX-J2荧光产品。与流行的DAF-2 NO探头相比，DAX-J2 Orange在NO检测方面具有明显的优势：1）它不需要酯酶活性即可检测NO。DAF-2需要细胞内酯酶裂解其乙酸酯基团才能检测NO活性。由于酯酶活性受细胞健康和许多其他因素的影响，这种酯酶依赖性通常使NO检测变得复杂。2）DAX-J2产品显示不依赖pH的荧光，而DAF-2的荧光受pH高度影响。3）DAX-J2荧光产品比DAF-2产品更具光稳定性。

样品操作及实验分析

1）在DMSO中准备5至10 mM DAX-J2 储备溶液。 通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）将DMSO储备溶液稀释到Hanks溶液中，制成1至10 μM的工作溶液。

2）根据需要处理细胞。

3）在37℃下，将细胞与1-10 μM（来自步骤1），DAX-J2 橙色（目录号1CS6300），红色（目录号CS16301）或比率580/460（目录号CS16310）孵育20 -60分钟。

4）用HHBS缓冲液代替染料加载溶液。

5）使用底部读取模式的适当荧光仪器分析细胞。

参考文献

Nitric oxide upregulates microglia phagocytosis and increases transient receptor potential vanilloid type 2 channel expression on the plasma membrane
Authors: Matthew JE Maksoud, Vasiliki Tellios, Dong An, Yun-Yan Xiang, Wei-Yang Lu
Journal: Glia (2019)

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44--48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1--12