我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位的丧失来检测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联反应中的其他下游事件。我们的Cell Meter NIR膜电位检测试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方法，可检测细胞凋亡的线粒体膜电位。该荧光测定法是基于我们专有的阳离子MitoLite NIR 染料对细胞中线粒体膜电位的检测。在正常细胞中，MitoLite NIR 主要在线粒体中积累，但是在凋亡细胞中，MitoLite NIR 染色强度降低。通过MitoLite NIR 染色的细胞可以通过流式细胞术观察到红色激发和远红色发射（FL4通道）。该试剂盒可与其他试剂配对，例如蓝激发碘化丙啶和Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒（＃22803），用于多参数研究细胞活力和凋亡。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪筛选凋亡激活剂和抑制剂。

样品实验方案

简要概述

1. 用5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
2. 将5 μL 200X MitoLite NIR加入1 mL细胞溶液中
3. 在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育细胞15-30分钟
4. 沉淀细胞，并将细胞重悬于1 mL生长培养基中
5. 使用带有FL4通道的流式细胞仪分析细胞

操作步骤

1.对于每个样品，在1 mL温暖的培养基或您选择的缓冲液中以5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。 注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。

阴性对照：仅用载体处理细胞。

阳性对照：在37℃，5％CO₂培养箱中，以5-50 μM的浓度用FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。 注意：CCCP或FCCP可以与MitoLite NIR同时添加。 为了获得最佳结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

3.向处理过的细胞中加入5 μL 200X MitoLite NIR（组分A）。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育15至30分钟。 注意：对于贴壁细胞，在用MitoLite NIR染料上样溶液孵育之前，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用含血清的培养基洗涤一次。

5.以1000 rpm离心细胞4分钟，然后将细胞重悬于1 mL分析缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中。

6.使用带有FL4通道的流式细胞仪（Ex / Em = 635/660 nm）检测荧光强度。

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