Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞凋亡检测试剂盒 ，我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。在凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察到形态变化之前进行检测。该试剂盒中使用的我们专有的Apopxin PS探针是基于小分子的PS探针，与膜PS结合后具有绿色荧光。使用流式细胞仪在FITC通道（绿色荧光）优化了此特定的测定试剂盒，以检测细胞凋亡。

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（200μL/样品）制备细胞
2.添加Apopxin Green检测溶液
3.在室温下孵育20-60分钟
4.使用FL1通道的流式细胞仪分析细胞（Ex / Em = 490/525 nm）

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。注意：对粘附细胞的Apopxin 结合流式细胞术分析不是常规检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。

2.离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.将2μLApopxin Green（组分A）加入细胞中。

5.可选：将2μL100X碘化丙啶（组分C）加入细胞中，用于坏死细胞。

6.在室温下孵育20至60分钟，避光。

7.可选：在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加200至300μL的测定缓冲液（组分B）以增加体积。

8.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测荧光强度。当碘化丙啶加入细胞时，使用FL2通道测量细胞活力。

数据分析

        在活的非凋亡细胞中，Apopxin Green检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，Apopxin Green与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

参考文献

Combined Treatments of Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia with Doxorubicin Promotes Synergistic Anti-Tumoral Activity.
Authors: D Hajj Diab El, P Clerc, N Serhan, D Fourmy, V Gigoux
Journal: Nanomaterials (Basel, Switzerland) (2018)