产品展厅
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Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有更高效率标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。iFluor 647 PSA试剂盒是基于Alexa Fluor 647酪酰胺的试剂盒或其他光谱相似的荧光酪酰胺或TSA试剂盒的出色替代品。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | Cy5滤波片组 |
| 发射： | Cy5滤波片组 |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 滤波片： | Cy5滤波片组 |
样品实验方案
简要概述
溶液配制
储备溶液配制
1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 μL DMSO加入iFluor 染料标记的Styramide 缀合物（组分A）的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。
2.H2O2溶液（100X）：向9 mL的ddH2O中添加1 mL的3％过氧化氢（组分E）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H2O2溶液。
工作溶液配制
1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 μL Styramide 储备溶液和10 μL H2O2 储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需的100 μL Styramide 工作溶液，提供的Styramide 足以进行100次测试。注意： 必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。
2.二级抗体-HRP工作溶液：在含1％BSA的PBS中以1：100稀释100X二级抗体-HRP储备溶液。注意： 此试剂盒中提供的二抗HRP足以用于100μL HRP工作溶液/盖玻片或96孔板中的每孔进行100次测试。
实验步骤
（该步骤适用于细胞或组织染色）
细胞固定和透化
1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。
2.用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。
4.用PBS冲洗细胞或组织两次。
组织固定，脱石蜡和补液
（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案 使用特定溶液进行抗原修复。）
过氧化物酶标记
1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。
2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。
3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。
4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。
5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
6.将100 μL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。
7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
Styramide标记
1.向每个样品中添加100 μL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的 孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。
2.用PBS冲洗3次。
复染和荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。
2.加上盖玻片。
3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。
表1.建议用于核复染色的产品。
| 货号 | 产品名称 | Ex/Em(nm) |
| CS17548 | 核蓝 DCS1 | 350/461 |
| CS17550 | 核绿 DCS1 | 503/526 |
| CS17551 | 核橙 DCS1 | 528/576 |
| CS17552 | 核红 DCS1 | 642/660 |
图示
 图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。 |  图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。 |  图3.使用iFluor PSA 成像试剂盒对甲醛固定，对石蜡包埋的人肺腺癌进行顺序免疫染色。用兔抗EpCam抗体和带有山羊抗兔IgG的iFluor 488 PSA 成像试剂盒标记EpCam， |
