4-甲基伞形酮磷酸二钠盐三水 MUP二钠盐是美国AAT Bioquest生产的MUP ，MUP二钠盐是磷酸酶的荧光底物，它广泛地用于溶液中磷酸酶的检测。然而这种磷酸酶底物并不适用于活细胞或者连续性分析，因为MU(4-甲基伞形酮)，酶促反应产物，只有在PH>10时才发出最大荧光。因此用MUP检测酸性范围内磷酸酶仍然是个难题，例如检测酸性磷酸酶。AAT Bioquest很高兴为大家提供MUP Plus，它与MUP底物相联系克服了其pH的限制性。

实验方案

1.准备工作：

1.1在升值溶剂中制备2至10 mM的储备溶液（参见表）。 应立即使用原液。 任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃冷冻。

注1：不要使用DMSO，ETOH或METH制备SunRed™磷酸盐（目录号11629）的储备溶液，因为它会显着增加分析背景。

注2：避免反复冻融循环，避免光照。

1.2制备2X磷酸盐工作溶液：在实验当天，将底物溶解在升值溶剂中或在室温下解冻等份的储备溶液（来自步骤1.1）。 在100 mM Tris缓冲液或您选择的缓冲液（pH 8至9）（非磷酸盐缓冲液）中制备10至50μM的2X工作溶液。

2.在上清液中进行磷酸酶测定：

2.1将50μL2X磷酸盐工作溶液（来自步骤1.2）加入磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总磷酸酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL2X磷酸盐工作溶液。

2.2在所需温度下孵育反应30至120分钟，避光。

2.3用荧光板读数器监测适当滤光片组（见表）的荧光增加。

2.4空白孔中的荧光（仅含测定缓冲液）用作对照，并从具有磷酸酶反应的那些孔的值中减去。

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