染色细胞示例

羟芪巴脒的使用与其他荧光示踪剂基本相同。主要区别在于Fluoro-Gold在注射后存活时间，浓度范围，组织治疗和与其他组织化学技术的兼容性方面更灵活。 它比大多数其他荧光示踪剂更耐褪色，更亮和荧光时间更长。

1.染料浓度：建议使用1至10％羟基芪脒。最初，建议浓度为4％。如果在注射部位发生坏死，或标记太强，则将浓度降低至2％溶液。

2.染料管理：

2.1压力注入 - 注射的体积范围为0.05-1μl，通常为0.1-0.2μl。

2.2结晶 -可以从微量移液管的尖端施用示踪剂的晶体。

3.固定剂：可以使用任何固定剂或不使用固定剂，但最常使用含有4％甲醛的PBS。含有高浓度重金属（如锇，汞）的固定剂会淬灭荧光，而高浓度（超过1％）的戊二醛可能会增加背景荧光。

4.组织化学处理：含有羟基芪脒的组织可以根据几乎任何常见的组织学技术进行处理。最常使用固定组织的冷冻切片。

5.适用实验：可以进一步处理切片用于第二标记，例如放射自显影，HRP组织化学，免疫细胞化学，第二荧光示踪剂，荧光复染剂等。

6.固定、覆盖：通常将切片安装在涂有明胶的载玻片上，风干，浸入二甲苯中，并用非荧光DPX塑料封固剂盖上盖玻片。切片可以用分级醇脱水，除非这与第二示踪剂不相容。如果将羟基噻嗪与荧光免疫细胞化学组合，则将切片风干并直接用DPX盖上盖玻片。

7.照相：使用宽带紫外激发滤光片（激发 -  323nm，发射 - 中性pH为620nm），用荧光显微镜观察羟基芪脒。当用中性pH缓冲液处理组织时发出金色，而当用酸性（例如PH3.3）pH缓冲液处理组织时发出蓝色。它可以用数码或胶片拍摄（使用Ektachrome 200-400 ASA胶片进行彩色打印，使用可比较的速度胶片进行黑白打印）。大多数曝光时间范围为10-60秒曝光，具体取决于物镜放大倍数和标记强度。三十（30）秒的暴露是平均的。可以利用多次暴露来同时显现羟基噻嗪和另一种示踪剂。因此，UV将与明场照明相结合，以在放射自显影中同时定位具有HRP或银颗粒的Fluoro-Gold。类似地，蓝光激发可以组合以也可视化FITC的绿色发射的颜色，而绿色激发光可以用于同时观察碘化丙啶或溴化乙锭（荧光复染剂）的红色发射的颜色。

参考文献

Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve
Authors: Norihito Uemura, Hisashi Yagi, Maiko T Uemura, Yusuke Hatanaka, Hodaka Yamakado, Ryosuke Takahashi
Journal: Molecular Neurodegeneration (2018): 21